
微衛星標記(Microsatellite)也稱為短串聯重復序列(STR)或簡單重復序列(SSR),是廣泛分布在真核生物基因組中的簡單重復序列,一般由一個長2~6bp的核心序列經多次串聯重復排列而成,重復次數大多在10~60次之間。近年來,大量研究表明STR基因分型方法是進行細胞交叉污染和性質鑒定的最有效和準確的方法之一,STR分型高效快捷,結果精確,是非常重要的遺傳標記,在基因定位、遺傳育種等領域有著廣泛的應用。STR基因分型應用于細胞鑒定已被ATCC等機構強烈推薦。美國的ATCC 細胞庫、德國的DSMZ細胞庫以及日本的JCRB細胞庫等為STR 分型提供了各細胞株的數據供比對。
微衛星位點通常通過PCR擴增和電泳檢測,并根據片段大小分離等位基因進行分析;擴增后的等位微衛星可以用多種方法檢測,傳統方法采用聚丙烯酰胺凝膠電泳加放射顯影或銀染的方法,費時費力效率低。利用ABI遺傳分析儀對熒光標記的DNA片段進行檢測,結合分子量內標進行DNA片段長度計算,使STR分型變得高效快捷,結果也更加精確。
STR鑒定實驗流程
1、實驗方案的設計,包括熒光標記的選擇,引物的設計、合成和標記、內標的選用等。
2、預實驗:確定PCR反應條件。
3、正式實驗:完成熒光PCR,并在測序儀上完成電泳掃描,數據采集,去掉低值數據,分析結果、補充測序、完成分析。
4、對收集的數據進行處理分析,提供產物片段大小、數量多少的信息數據。
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